码蛋方式的改变对X期鸡胚体外发育的影响
索南才仁
摘要：在种蛋大头开1.5 cm × 1.0 cm椭圆形口的情况下，就翻蛋和码蛋方式对X期鸡胚体外发育的影响进行了研究。从试验结果来看，①9日龄的存活率两组分别达73%和80%，表明0日龄种蛋在大头开孔后，0～8日龄小头向上翻蛋进行孵化是较为合适的。8日龄时码蛋方式的转变，即小头向上转变为大头向上，使鸡胚出现快速死亡，12日龄时两组鸡胚全部死亡。②对比6～9日龄的存活率，大头向上码蛋组从6日龄到9日龄存活率下降了7%，而横放码蛋组的存活率没有下降，因此，在8日龄码蛋方式发生改变后，两组存活率的下降并不明显（P>0.05），但至12日龄时两组鸡胚均全部死亡。试验结果表明，8日龄时，码蛋方式由小头向上转变为大头向上或横放会加快鸡胚的死亡，尤其是转变为大头向上。
关键词：翻蛋次数；置蛋方式；孵化率
中图分类号：S831 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2017）05-0010-02
禽类胚胎是发育生物学研究的良好实验材料，利用体外培养技术可以满足对各个发育阶段的胚胎进行操作的需要，而且便于观察。然而鸡胚体外培养的孵化率并不高，特别是刚产下的X期的胚胎。郝志明等[1]采用抽蛋清的方法对X期鸡胚体外培养的影响因素进行了研究，发现抽取1 mL蛋清后，3日龄鸡胚的孵化率达到81.3%，而X期鸡胚的孵化率仅为31.3%。为了进一步探究造成X期鸡胚体外培养孵化率下降的主要原因，本试验就翻蛋和码蛋方式对X期鸡胚体外培养的影响进行了研究，以期提高X期鸡胚体外培养的孵化率，促进鸡胚生物工程技术的发展。
1 试验方法
1.1 试验设计
试验一：在鸡蛋大头顶端开1.5 cm×1.0 cm椭圆形口的情况下，翻蛋和码蛋方式按下述方法进行： 0～8日龄小头向上翻蛋，8～12日龄大头向上不翻蛋，12日龄以后大头向上翻蛋（一组）或大头向上不翻蛋（二组），以研究12日龄后翻蛋对X期鸡胚体外发育的影响。
试验二：在鸡蛋大头顶端开1.5 cm×1.0 cm椭圆形口的情况下，翻蛋和码蛋方式按下述方法进行：0～8日龄小头向上翻蛋，8～12日龄大头向上（一组）或横放（二组）不翻蛋，12日龄后大头向上（一组）或横放（二组）翻蛋，以研究8日龄后码蛋方式对X期鸡胚体外发育的影响。
1.2 方法
操作全过程在超净工作台上进行。试验前，擦净超净工作台，将所有器械和试剂置于超净工作台上，紫外线照射30 min以上进行消毒。用塑料饮料瓶剪切封口盖，封口盖的大小较蛋壳开口大2 mm，形状同蛋壳开口。剪好的封口盖需置于盛有75%乙醇的平皿中浸泡30 min，并分散置于铺有硫酸纸的超净工作台上，紫外线照射消毒并晾干。种蛋则用酒精棉球擦拭消毒，确保整个蛋壳表面均被擦拭并晾干。用铅笔在种蛋的大头画1.5 cm×1.0 cm椭圆，然后用手术刀片沿所画线的外沿在蛋壳上刻出划痕，除去划痕内的蛋壳和蛋壳膜，切口应尽量平滑，除去蛋壳膜时应用镊子小心向切口处夹取，不得破坏切口外的蛋壳膜。开口种蛋用预制好的塑料封口盖盖好，再用封口胶粘合封闭，确保封闭严实，无外漏。封好后开口向下放置20 min，检查是否有漏出蛋清的现象，如有需进行修补。
按照试验分组的设计方案，将开过口的种蛋放置于孵化器托盘中。
孵化条件：孵化温度为37.80 ℃，湿度为60%～65%。出雏温度为37.00 ℃，湿度为70%～75%。翻蛋为自动翻蛋，每2 h一次，翻蛋角度为±45°。孵化期间，每日早、晚观察孵化器2次，并记录孵化器温度、湿度和翻蛋次数。孵化18 d时落盘，21 d时观察出雏情况[2]。分别在孵化的第3、6、9、12、15和18天进行照蛋，观察胚胎的心脏、胎膜、血管、胚体等，以此来判断鸡胚的存活以及胚胎的发育情况。死亡鸡胚及时打开，觀察死胚的发育情况。试验数据用百分数表示，并用t检验对组间的差异进行显著性分析。
2 结果及分析
2.1 12日龄后翻蛋对X期胚胎体外发育的影响
本试验的目的是想确定12日龄后翻蛋对X期鸡胚体外发育有无影响，但从表1来看，12日龄后鸡胚已全部死亡，因此试验设计没有达到预想的效果。但从9日龄的存活率来看，两组的存活率分别达73%和80%，表明0日龄种蛋在大头开1.5 cm×1.0 cm椭圆形孔后，0～8日龄小头向上翻蛋进行孵化是较为合适的[3]。但8日龄码蛋方式的转变，即小头向上转变为大头向上使鸡胚出现快速死亡，至12日龄时，两组鸡胚均全部死亡。
2.2 8日龄后码蛋方式对X期鸡胚体外发育的影响
由表2可见，9日龄存活率方面，大头向上码蛋组和横放码蛋组的存活率分别为73%和93%，两组之间具有明显的差异（P<0.05），但从6～9日龄的存活率来看，大头向上码蛋组6～9日龄存活率下降了7个百分点，而横放码蛋组的存活率没有下降，因此，在8日龄码蛋方式发生改变后，两组存活率的下降并不明显（P>0.05）。但12日龄时鸡胚仍全部死亡[4]。
3 鸡胚死亡主要原因分析
研究结果表明，鸡蛋开口及抽取蛋清会对鸡胚的体外发育产生重要的影响。从本试验结果可以看出，鸡蛋开孔对鸡胚的发育有很大影响。通过对死亡鸡胚的解剖发现，死亡鸡胚常常出现胎膜与蛋壳膜的粘连、胎膜与蛋壳内膜的分离以及鸡胚发育迟缓。蛋壳开孔后若翻蛋，可引起胎膜与蛋壳膜的粘连以及胎膜与蛋壳内膜的分离，胎膜与蛋壳膜的粘连可破坏胎膜，引起出血和胚胎的死亡；而胎膜与蛋壳内膜的分离则影响鸡胚营养物质的吸收，从而影响鸡胚的正常生长发育。若不进行翻蛋，则会影响鸡胚的运动、血液循环和生长发育，甚至粘连，引起鸡胚死亡。
4 结论
8日龄时，码蛋方式由小头向上转变为大头向上或横放会加快鸡胚的死亡，尤其转变为大头向上时鸡胚更易死亡。
参考文献：
[1] 郝志明，马文芝，祁茂铜，等.空气对X期鸡胚原壳发育的影响[J].西北农业学报，2005，14（5）：45-48.
[2] 杨 宁.现代养鸡生产[M].北京：北京农业大学出版社，1994.125-126.
[3] 郝志明，马文芝，祁茂铜，等. 鸡胚原壳体外培养研究[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2005，33（9）：28-31.
[4] ANDACHT T，HU W，IVARIE R. Rapid and improvement method for windowing eggs accessing the stage Ⅹ chicken embryo[J].Molecular Reproduction and Development，2004，69：31-34.
