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针康法通过缓解颅内炎症反应对糖尿病脑卒中大鼠运动功能的改善作用研究

范文

孙妲男郑剑唐强

【摘要】目的探究针康法通过缓解颅内炎症反应对糖尿病脑卒中大鼠运动功能的改善作用。

方法 60只大鼠，随机分为空白组、假手术组、模型组、针康组、针刺组以及康复组，各10只。采用高糖高脂饮食、链脲佐菌素（STZ）腹腔注射以及改良线栓法建立糖尿病脑卒中大鼠模型，分别采用不同方式干预21 d后评价各组大鼠运动能力，检测各组大鼠脑组织中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平，并进行比较。结果针刺组、康复组及针康组大鼠平衡木行走试验评分均较干预前显著改善，差异具有统计学意义（P<0.05）;针康组大鼠干预后平衡木行走试验评分（1.17±0.84）分

均显著低于针刺组的（2.26±0.83）分及康复组的（2.39±0.66）分，差異均有统计学意义（P<0.05）。干预后，模型组、针刺组、康复组及针康组大鼠脑组织IL-6、TNF-α水平均较空白组、假手术组大鼠显著升高，差异均有统计学意义（P<0.05）;针刺组、康复组及针康组大鼠脑组织IL-6、TNF-α水平均较模型组显著下降，差异均有统计学意义（P<0.05）;针康组IL-6、TNF-α水平分别为（120.88±

55.67）pg/ml、（1.58±0.47）ng/ml，均显著低于针刺组的（273.64±52.64）pg/ml、（2.36±0.59）ng/ml及康复组的（251.75±70.31）pg/ml、（2.58±0.61）ng/ml，差异有统计学意义（P<0.05）。结论针康法能够通过缓解糖尿病脑卒中大鼠颅内炎症反应并改善大鼠运动功能。

【关键词】针康法;颅内炎症;糖尿病脑卒中大鼠;运动功能

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.34.102

临床上糖尿病并发脑血管疾病已经成为糖尿病患者的主要死因[1， 2]，且糖尿病已被证实是脑梗死的重要独立危险因素之一。糖尿病患者一旦并发脑卒中，无论是出血性还是缺血性脑卒中，其预后都较非糖尿病患者明显下降。经过我国中医学者多年研究，中医针灸联合现代康复医学已经能够有效改善糖尿病合并脑卒中患者的预后[3]，明显提高生活质量。本研究通过观察针康法对糖尿病脑卒中大鼠脑组织IL-6、TNF-α水平及运动功能的影响，探究其通过缓解颅内炎症反应对糖尿病脑卒中大鼠运动功能的改善作用，现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 实验动物采用黑龙江中医大学实验动物中心提供的SPF级健康雄性SD大鼠（180～220 g）150只，经过7 d适应性饲养后分为造模，最终分为假手术组、模型组、针刺组、康复组、针康组，每组10只。本研究经学校伦理委员会通过。

1. 2 糖尿病脑卒中模型制备

1. 2. 1 糖尿病大鼠模型大鼠高糖高脂饮食（20%蔗糖+

2.5%胆固醇+10%猪油+0.2%胆盐+67.3%基础饲料）喂养4周后一次性腹腔注射2%的STZ[4， 5]，剂量为35 mg/kg。

1. 2. 2 糖尿病大鼠模型建立成功后建立糖尿病大鼠脑卒中模型取0.26 mm粗细的鱼线30 mm长作为栓线，标记于18 mm处，头端烧圆。大鼠禁食6 h后用3.5%水合氯醛

（1 ml/100 g）行腹腔注射，麻醉完全后行颈部正中切口，分离出左侧颈内动脉、颈外动脉及颈总动脉，将颈外动脉主干及颈总动脉近心端结扎，置线于颈总动脉远端，夹闭左颈总动脉分叉处，距分叉处以上0.4 mm行“V”字形切口，插入至18 mm，使线栓跨过大脑中动脉开口至大脑前动脉起始部，结扎备线，复位组织缝合切口。假手术组除栓线固定10 min但不阻断血流外，其余操作同前。

1. 2. 3 模型成功标准 STZ给药7 d后随机血糖>13.8 mmol/L

且体重>250 g为糖尿病大鼠建模成功，脑卒中术后6 h行Bederson神经功能评分[6]在1～3分大鼠提示造模成功。

1. 3 干预方法针刺组：根据“大鼠学位谱图”于成模第

2天予以头穴丛刺。针灸针在百会穴及其两侧4 mm处向前平刺至顶前区，深度0.5寸，捻转1 min后留针1 h，捻转速度为150次/min， 2次/d。康复组：成模第2天予以跑台训练，跑台坡度为0， 1次/d， 20 min/次，履带速度依次递增：前3 d

为5 m/min， 4～7 d为10 m/min， 14～21 d为15 m/min。针康组：同时予以针刺及跑台训练。

1. 4 观察指标及判定标准比较各组干预前后平衡木行走试验评分，评分标准：1分：能够保持身体平衡，四肢均触于木条表面;2分：只有一侧爪子能够握住木条或整个躯体在平衡木上摇晃;3分：出现一或两个肢体滑下平衡木;4分：平衡功能差，三个及以上肢体滑下木条;5分：努力在平衡木上保持平衡但跌落平衡木;6分：保持平衡失败，悬吊在平衡木上然后跌落;7分：直接从木条上跌落而无努力保持平衡的意向。取脑组织采用ELISA法测定IL-6及TNF-α水平。各组大鼠行为学测试结束后，用10%水合氯醛

（300 mg/kg）腹腔注射麻醉，麻醉完全后立即断头取脑，取出的脑组织作冠状切面，自切面向头侧3 mm作另一切面取材，脑组织立即研磨碎，加入PBS后放入离心机中以3500 r/min

离心20 min，取上清液后-20℃保存，根据ELISA说明书测定各组大鼠脑组织IL-6及TNF-α水平。

1. 5 统计学方法采用SPSS20.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示，采用t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 各组大鼠平衡木行走试验评分比较空白组、假手术组及模型组大鼠干预前后平衡木行走试验评分组内比较，差异无统计学意义（P>0.05）;模型组大鼠干预前、后平衡木行走试验评分与空白组、假手术组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）;针刺组、康复组及针康组大鼠平衡木行走试验评分均较干预前显著改善，差异具有统计学意义（P<0.05）;针康组大鼠干预后平衡木行走试验评分均较针刺组及康复组显著下降，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2. 2 各组大鼠干预后脑组织IL-6及TNF-α水平比较模型组、针刺组、康复组及针康组大鼠脑组织IL-6、TNF-α水平均较空白组、假手术组大鼠显著升高，差异均有统计学意义（P<0.05）;针刺组、康复组及针康组大鼠脑组织IL-6、TNF-α水平均较模型组显著下降，差异均有统计学意义（P<0.05）;与针刺组、康复组相比，针康组IL-6、TNF-α水平更低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

3 讨论

脑组织缺血损伤主要表现为大脑生理屏障破坏，炎症因子激活及细胞外基质损伤。炎症反应是在相关促炎因子的作用下不断放大，促进血液及组织间隙中各种炎症细胞的聚集、粘附，不断加重脑组织损伤。糖尿病脑卒中大鼠模型的建立对于研究糖尿病并发脑血管意外意义重大，本研究通过高糖高脂饮食、STZ腹腔注射以及线栓法成功建立该动物模型，线栓法制备局灶性脑缺血模型有众多优点，首先经济、实用，其次能够精确控制缺血及再灌注时间，缺血效果可靠，模型稳定性以及重复性好等，目前逐渐成为90年代以来国内外广泛使用的方法[6-8]。栓塞大脑中动脉与临床糖尿病并发脑卒中患者的病理生理过程相似，故建立的模型与临床工作联系紧密，具有重要的研究价值。

众多研究证实，针刺疗法对于改善脑卒中引起的肢体偏瘫及促进肢体神经功能恢复有显著效果，于致顺教授创造的头穴丛刺法结合了丰富临床经验和科学研究，提出“头部透穴治疗脑血管疾病后瘫痪”的论点，认为针刺头部穴位能够产生一种“针场”，随着经络传送至大脑皮质特定区域并刺激该部位，改善神经细胞兴奋性，促进神经功能恢复。

本研究结果提示，针康法可以显著改善糖尿病脑卒中大鼠运动功能，针康组大鼠干预后平衡木行走试验评分显著低于针刺组及康复组，差异有统计学意义（P<0.05）。本研究采用的跑台训练是目前国际通行的卒中后恢复运动，可以精确调控运动强度，有利于量化康复训练，其能通过重新建立部分脑的“连接”进而改善脑卒中患者的行走能力，跑台训练能显著降低大鼠脑缺血后的损伤，可能与训练后脑损伤区血管的生成及血管生成因子的表达增加有关。现代康复学认为，脑卒中后早期康复应当待患者生命体征平穩且无明显神经功能损伤症状24 h后进行[9]。进入运动康复治疗阶段，通过有机结合头穴针刺与康复训练促进神经功能恢复。颅内炎症反应的轻重往往与运动功能恢复密切相关[10]。本研究结果显示，针康法可以有效减轻糖尿病脑卒中大鼠颅内炎症因子数量，炎症反应是一种生理性保护机制，过度激活的炎症反应会导致组织损伤，炎症反应参与了脑卒中的生理过程[11]，对脑组织的损伤可能比脑卒中本身更严重，缺血灶的炎症细胞会促进炎症因子及抗炎细胞因子表达上调[12]，损伤神经细胞。

综上所述，针康法能够缓解糖尿病脑卒中大鼠颅内炎症反应并改善大鼠运动功能。

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[收稿日期：2019-07-16]

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