止咳平喘合剂中药用成分东莨菪碱的安全范围研究

    杨勇帮 代薇薇

    

    

    

    摘要:目的 测定止咳平喘合剂中东莨菪碱的含量,根据东莨菪碱的毒性用法用量判定是否符合药用量规定,并判定出止咳平喘合剂的用法用量是否在安全用量范围内。 方法 色谱柱采用ZORBAX SB-C18柱(4.6×250 mm 5-Micron),流动相为甲醇—水(40∶60∶含0.02 mol·L-1醋酸钠、0.02%三乙胺、用冰醋酸调至pH为6),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为205 nm,柱温是30℃。 结果 氢溴酸东莨菪碱在0.004~>0.016 mg·mL-1范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为100.1%,RSD=1.6。止咳平喘合剂成人每次口服量为50 mL,实验得到止咳平喘合剂中东莨菪碱含量为0.0075 mg·mL-1,换算即得成人每次口服东莨菪碱量为0.375 mg。另《中国药典》2015年版一部规定洋金花内服用量为0.3~>0.6 g,洋金花原料以东莨菪碱计不得少于0.15%,折算东莨菪碱量为0.45~>0.9 mg,得知止咳平喘合剂中东莨菪碱的含量在相关规定的用药安全范围内。 结论 该方法可用于止咳平喘合剂中東莨菪碱的含量测定,本方法简单便捷、准确度高。

    关键词:止咳平喘合剂;洋金花;东莨菪碱;HPLC;含量

    中图分类号:R285.5 文献标志码:A 文章编号:1007-2349(2021)04-0080-05

    止咳平喘合剂是医院住院部用来治疗哮喘咳嗽的协订处方,特别是中老年患者临床效果显著,治愈率高。其处方中的洋金花平喘止咳力强,适用于喘咳无痰,尤宜于寒性哮喘[1]。但本品有毒用药安全备受关注,对止咳平喘合剂处方质量标准进行研究,特别是对方中的东莨菪碱含量进行测定,保证临床患者的用药安全有效,意义重大。

    洋金花为茄科植物白花曼陀罗 Datura metel L.的干燥花。4~>11月初开时采收,晒干或低温干燥。具有平喘止咳,解痉定痛等功效[3]。在止咳平喘合剂中主要效用就是止咳平喘,与枇杷叶配伍使用,有清肺化痰、止咳平喘之功。洋金花中的主要成分是莨菪烷型生物碱,其中以东莨菪碱为主、莨菪碱次之,还有阿托品等[2]。东莨菪碱有毒,使用时需控制其用量。东莨菪碱口服极量为5毫克/次,致死量为8毫克左右[4]。

    1 仪器与试药

    1.1 仪器 高效液相色谱仪(Agilent 1260)、电子天平(赛多利斯BP211D-OCE)、紫外可见分光光度计(Agilent cary60)等。

    1.2 试药 止咳平喘合剂(医院自制)、 氢溴酸东莨菪碱对照品(中国食品药品检定研究院 批号:100049-201310,含量以91.7%)、甲醇(色谱纯)、冰醋酸(分析纯)、 纯化水(超纯水)等。

    2 方法条件确定

    2.1 紫外下检测波长扫描 紫外下多次测定得到对照品在紫外下最大吸收波长为195、205、215 nm。图1所示,波长在205 nm时吸光度最大为3.249。

    2.2 筛选流动相 流动相一:甲醇-水(40∶60;0.02 mol·L-1磷酸二氢钾、0.2%三乙胺、用磷酸调至pH为2),流动相二:甲醇-水(40∶60;0.02 mol·L-1醋酸钠、0.02%三乙胺、用冰醋酸调至pH为6)。如图2

    所示,流动相一,对照品出现两个峰,保留时间较短;流动相二,对照品出现一个峰,保留时间较适宜。最终选定,流动相为流动相二。

    2.3 柱温 在20、30、40℃ 3个不同的柱温下,平行进行实验3次,筛选出比较适宜的柱温。经过试验30℃时的出峰时间最短,最终选定柱温为30℃。

    2.4 色谱柱 通过比较不同的色谱柱,最终确定使用ZORBAX SB-C18柱(4.6×250 mm 5-Micron)分离效果良好。

    2.5 样品提取方法 对使用离心、中性氧化铝柱分离、氯仿萃取等方法进行比较分析并优化最终确定提取方法为:精密量取样品10 mL,用氨水调至碱性(pH 8~>9),再用氯仿萃取4次,每次10 mL。合并4次的氯仿液,置水浴上80℃蒸干。残渣加甲醇溶解,并定容至5 mL。

    3 溶液配制

    3.1 对照品溶液的制备 精密称取10 mg氢溴酸东莨菪碱,用甲醇溶解定容至25 mL,制得0.4mg·mL-1的溶液,再取5 mL溶液用甲醇定容至50 mL,制得0.04 mg·mL-1的对照品溶液。

    3.2 样品溶液的处理 精密量取样品10 mL置分液漏斗中,用氨水调至碱性(pH8-9),再用三氯甲烷提取4次,每次10 mL。合并氯仿溶液,置80℃水浴上蒸干。残渣加甲醇溶解至5 mL容量瓶,加甲醇定容至刻度,滤过,取续滤液,经0.45μm微孔滤膜滤过,即得。

    3.3 阴性对照溶液的处理 取不含洋金花药材的空白样品照样品溶液处理方法制备,即得阴性对照溶液。

    4 色谱条件

    固定相:ZORBAX SB-C18柱(4.6×250 mm 5-Micron),流动相:甲醇-水(40∶60;0.02 mol·L-1醋酸钠、0.02%三乙胺、用冰醋酸调至pH为6),柱温:30℃,进样量对照溶液10 μL、样品溶液20 μL,检测波长:205 nm。

    5 检测方法及结果

    5.1 专属性考察 按样品溶液处理方法处理阴性对照一份,进样20 μL。如图3所示,阴性对照在与对照品相近的保留时间段未出现样品峰,说明其它组分对实验无干扰。

    5.2 线性关系考察

    5.2.1 标准曲线的配制 取0.4 mg·mL-1对照品母液,加甲醇分别配制成浓度为0.16、0.08、0.04、0.02、0.01、0.005 mg·mL-1的溶液。

    5.2.2 线性关系的测定 取由对照品母液配制而成的6份溶液各一份,用微孔滤膜过滤,进样,测定峰面积,计算浓度和峰面积的回归方程,最后计算r值。见表1及图4。

    氢溴酸东莨菪碱在0.005~>>0.16 mg·mL-1范围内线性关系良好,r为0.9999。

    5.3 精密度实验 取浓度为0.04 mg·mL-1的对照品溶液,平行进样5次,每次进样10 μL,测定峰面积,计算RSD值。见表2。RSD值为0.27,实验的精密度良好。

    5.4 稳定性实验 取止咳平喘合剂样品溶液按照样品溶液处理方法处理一份,在0、0.5、4、8、32 h分别进样20 μL,分别测定峰面积,计算RSD值。见表3。

    RSD值为1.18,说明氢溴酸东莨菪碱在0~>32 h内稳定性良好。

    5.5 重复性实验 按照样品溶液处理方法,平行处理5个样品溶液,每个样品进样20 ul,测定峰面积,计算各个样品溶液中氢溴酸东莨菪碱的含量,计算含量的RSD值。见表4。RSD值为1.024,说明在进行此实验时,进样系统的重复性良好。

    5.6 样品溶液中氢溴酸东莨菪碱的含量比较 按照样品溶液处理方法平行处理三个批次的样品溶液各一份,各进样20 μL,进对照品溶液10 μL,测定各自的峰面积,计算氢溴酸东莨菪碱含量,进行3个批号止咳平喘合剂中氢溴酸东莨菪碱的含量比较。

    5.7 加样回收实验 取5 mL止咳平喘合剂样品溶液和1 mL浓度为0.0485 mg·mL-1对照品溶液置分液漏斗中,用氨水调至碱性(pH8~>9),用氯仿萃取4次,每次10 mL,合并氯仿溶液,置80℃水浴上蒸干,残渣加甲醇定容至5 mL,作为加样回收的样品。平行处理5份。分别进样20 μL,测定峰面积,计算各自的含量和回收率,最终计算回收率的RSD值。见表6。加样回收率在95~10%,RSD值为1.6。

    6 讨论

    东莨菪碱的安全性。据文献报道,东莨菪碱口服极量为5 mg/次,致死量为8 mg左右。根据《中国药典》2015版一部规定洋金花内服用量为0.3~>0.6 g,洋金花原料以东莨菪碱计不得少于0.15%,折算东莨菪碱量为0.45~>0.9 mg。

    每日用量:从试验得知,止咳平喘合剂氢溴酸东莨菪碱含量为0.0108 mg·mL-1,折算得到东莨菪碱含量为0.0075 mg·mL-1(东莨菪碱=氢溴酸东莨菪碱/1.445)[2],本方洋金花用量1.5 g,最终制成250 mL药液。包装规格为50 mL/袋,共5袋。成人每次口服50 mL,换算即得每次口服东莨菪碱量为0.375 mg,疗程用量:每个疗程用药5次,换算即得每个疗程用藥量中含东莨菪碱1.875 mg。

    综上所述,止咳平喘合剂中东莨菪碱的含量在相关规定的用药安全范围内。

    参考文献:

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    [2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:中国医药科技出版社,2015:1332.

    [3]盛涵恩,王红玲.桂附理中丸治疗不稳定型心绞痛心肾阳虚证临床研究[J].中医学报,2016,31(8):1182-1185.

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    [6]陈朋朋,付传香,吴泽宇,等.东莨菪碱医药中间体的研究进展[J].安徽化工,2017,43(6):1-4.

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    (收稿日期:2020-11-28)