液相色谱—串联质谱法测定海参中的甲氰菊酯和扑草净含量

2022年6月3日23:07:38液相色谱—串联质谱法测定海参中的甲氰菊酯和扑草净含量已关闭评论
摘要

马瑞欣 周凡 李雪萍 王晓静 张鹏燕摘要:建立了液相色谱-串联三重四极杆质谱法(LC-MS/MS)同步检测海参中的甲氰菊酯和扑草净。样品用乙腈提取,中性氧化铝柱净化,LC-MS/MS分析,基质

    马瑞欣 周凡 李雪萍 王晓静 张鹏燕

    

    

    

    摘要:建立了液相色谱-串联三重四极杆质谱法(LC-MS/MS)同步检测海参中的甲氰菊酯和扑草净。样品用乙腈提取,中性氧化铝柱净化,LC-MS/MS分析,基质标准曲线定量。结果表明,甲氰菊酯和扑草净在0~50ng/mL范围内呈良好线性,相关系数均在0.999以上,方法检出限为1.0μg/kg,定量限为5.0μg/kg。在5.0μg·kg-1、10μg·kg-1、50μg·kg-1添加水平下,甲氰菊酯平均回收率在71%~88%之间,扑草净平均回收率在86%~92%之间,RSD均小于10%。该方法操作简单,分析速度快,可适用于海参中的甲氰菊酯和扑草净同时测定。

    关键词:液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS);海参;甲氰菊酯;扑草净

    甲氰菊酯别名灭扫利,是一种广谱拟除虫菊酯类杀螨杀虫剂,中等毒性,广泛用于棉花、水果、蔬菜和茶叶等多种经济作物;扑草净主要作用于大豆、花生、棉花、水稻、甘蔗等作物,防除禾本科杂草和阔叶杂草,中等毒性。两种农药均不得在水产养殖中使用。海参池塘养殖过程中易受到病虫和大型藻类的危害[1-2],有些养殖户非法使用甲氰菊酯和扑草净杀虫灭藻。目前食品中的甲氰菊酯和扑草净检测标准为气相色谱-质谱法[3-5],气相色谱-质谱法前处理繁琐,分析时间长,且单四极杆受试剂空白干扰大,对低浓度的样品定性定量造成困扰。

    本方法建立了液相色谱-串联质谱法分析海参中的甲氰菊酯和扑草净,前处理简单,分析速度快,抗干扰能力强,可以对两种农药同时进行定性和定量,极大提高了检测速度,减少了检测差错率。

    1实验部分

    1.1仪器、试剂与材料

    LC-20AD液相色谱仪(日本岛津)、QTRAP4500三重四极杆质谱仪(美国ABSCIEX)、百分之一电子天平(赛多利斯)、平行蒸发仪(瑞士BUQI)、TDZ5-WS离心机(湖南湘仪)、MS3涡旋混合器(IKA)、JYS-A8000绞肉机(九阳)。

    甲氰菊酯:1000μg/mL(正己烷);扑草净:1000μg/mL(丙酮),均为北京北方伟业计量技术研究院生产。

    乙腈和甲醇(HPLCGrade,Merck)、中性氧化铝柱:1000mg/6mL(DIKMA)、甲酸(HPLCGrade,DIKMA)、0.2μm滤膜(PALL),实验所用水为超纯水。

    1.2试样制备

    海参去内脏后切成小块后混匀,绞肉机绞碎,装入洁净容器中,密封,-20℃保存。

    1.3样品前处理

    称取5.00g样品(精确到0.01g)于50mL离心管中,加入10mL乙腈,3000r/min涡旋混匀2min,4000r/min离心5min,上清液移入25mL比色管中;残渣中再加入10mL乙腈,3000r/min涡旋混匀2min,超声5min,4000r/min离心5min,上清液合并至25mL比色管中,乙腈定容至25.0mL,混匀备用。

    中性氧化铝柱5mL乙腈活化后,准确移取5.00mL提取液至中性氧化铝柱上,流出液接入蒸发管中,5mL乙腈洗涤中性氧化铝柱,收集全部流出液。45℃蒸发至干。准确加入2.00mL乙腈+水(1+1)洗涤蒸发管内壁,经0.2μm滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱分析。

    1.4液相色谱-串联质谱条件

    液相色谱条件:色谱柱AccucoreTMaQ(100mm×2.1mm,2.6μm),柱温40℃,流速0.5mL/min,进样量5μL,流动相A为0.005mol/L乙酸铵溶液(含0.3%甲酸),B为甲醇;梯度洗脱程序:0~1min,10%B;1~3min,10%B~90%B;3~5min,90%B;5~5.1min,90%B~10%B;5.1~7min,10%B。

    质谱条件:电喷雾离子源(ESI),多反应扫描(MRM)正离子模式,喷雾电压5500V,气帘气30PSi,碰撞气Medium;温度550℃;雾化气:55PSi;辅助加热气:55PSi。质谱条件及参数见表1。

    1.5标准曲线配制

    取甲氰菊酯和扑草净的标准溶液各100μL于同一进样小瓶中,氮气吹干溶剂后,准确加入1mL乙腈,混匀,为100μg/mL标准溶液,用空白基质逐级稀释成0.1,0.5,1.0,2.0,5.0,10,25,50ng/mL的标准系列。

    2结果与讨论

    2.1质谱条件的确定

    分别取1μg/mL的甲氰菊酯和扑草净溶液通过蠕动泵注入质谱中,寻找母离子、子离子和碰撞能,并优化去簇电压和碰撞池出口电压。甲氰菊酯的一级质谱图显示其加NH+4离子m/z367.1信号比其本身母离子m/z350信号强,并由实验结果进行了证实。因此本文选用m/z367.1作为甲氰菊酯的母离子进行分析。

    2.2基质效应

    以基质标准曲线与溶剂标准曲线的斜率比值来评定基质效应,标准曲线见表2;甲氰菊酯的基质效应为59.6%,扑草净的基质效应为74.5%,二者均表现为基质抑制,其中甲氰菊酯基质抑制更明显。因此选用基质标准曲线进行定量。

    2.3线性范围

    以浓度为横坐标,定量离子峰面积为纵坐标绘制标准曲线,甲氰菊酯和扑草净基质标准曲线在0~50ng/mL范围内均呈现良好线性关系,线性系数r>0.999。甲氰菊酯和扑草净基质标准溶液的多反应扫描质量色谱图见图1。

    2.4回收率和精密度

    通过空白样品添加标准物质的方式进行回收率和精密度测试,添加梯度为1.0、5.0、10、50μg·kg-1,回收率和精密度见表3和表4。由表中数据可知,在5.0~50μg·kg-1添加范围内,甲氰菊酯平均回收率在71%~88%之间,RSD在5.1%~9.0%之间;扑草净平均回收率在86.6%~92.4%之间,RSD在3.5%~6.9%之间。

    2.5检出限和定量限

    通过分析表3和表4中的回收率和RSD值,甲氰菊酯和扑草净的检出限可定为1.0μg·kg-1,定量限可定为5.0μg·kg-1。

    2.6实际样品检测

    检测实际样品38份,检测结果与气相色谱-质谱法一致。

    3结论

    本方法建立了液相色谱-串联质谱法同时检测海参中的甲氰菊酯和扑草净。前处理操作简单,可操作性强,分析速度快,准确度和精密度满足检测方法学的要求,可作为海参中甲氰菊酯和扑草净的定性、定量检测方法。

    参考文献:

    [1]

    孙爱丽.海参养殖池塘中几种大型藻类的危害及其防治措施[J].水产养殖,2014(5):28-29.

    [2]房英春,张慧,陈曦.海参养殖常见病害的诊治[J].中国水产,2008(1):70-71.

    [3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.进出口食品中甲氰菊酯残留量检测方法:SN/T2233-2008[S].北京:中国标准出版社,2009:1-17.

    [4]中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员.动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测定:GB/T5009.162-2008[S].北京:中国标准出版社,2009:1-16.

    [5]中華人民共和国国家质量监督检验检疫总局.进出口食品中扑草净残留量检测方法气相色谱-质谱法:SN/T1968-2007[S].北京:中国标准出版社,2008:1-6.

    (收稿日期:2021-05-07)