猪细小病毒病的诊断及防治措施
刘欢+刘好朋++贺东生
摘要：从临床症状、病理变化、诊断方法等多方面详细介绍了猪细小病毒病的发病特点、诊断和预防措施，旨在引起兽医工作者对该病的重视，同时也为猪场诊断、预防该病提供理论基础。
关键词：猪细小病毒；临床症状；诊断方法；防制措施
中图分类号：S858.28 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2014）12-0019-02
猪细小病毒病是由细小病毒（PPV）引起的猪传染病，广泛存在于猪群中，感染率高，一些养殖户仔猪出生后死亡的现象越来越突出，造成很大经济损失。2014年7月，韶关市某猪场发现以1～2胎为主的新母猪发病，表现为分娩延迟，产死胎、木乃伊胎，有部分健康活仔，窝产仔数偏少，母猪均表现正常，发病率100%。笔者经临床检查、解剖观察、实验室检验等方法确诊为猪细小病毒病，现将该病的诊疗情况进行报告，并结合实际经验，对猪细小病毒病的防治措施进行介绍。
1 临床症状
1.1 母畜生殖障碍
PPV感染的主要临床症状是母畜生殖障碍，表现为头胎或经产母猪产出大部分死胎、木乃伊胎、畸形胎及正常胎儿，或产少数不久即死的虚弱仔猪。
1.2 生殖临床症状
生殖临床症状与发生感染的妊娠阶段有关。妊娠母猪特别是头胎的妊娠母猪如感染该病，在其全部妊娠期内均可发生流产。当妊娠早期（6～35 d）受到感染时，胎儿死亡率可高达80%～100%，母猪迅速吸收死亡胎儿，导致不孕和重复发情[1]；母猪在妊娠中期（35～70 d）感染病毒后，常形成不同程度的木乃伊胎儿，在分娩时排出；母猪在妊娠中期（70～114 d）感染病毒后，因胎儿自身免疫反应而抵御病毒得以存活，但长期带毒[2]。一般来讲，母猪在免疫中后期感染病毒后死产发生率10%[3]。公猪感染后，受精率或性欲没有明显的影响，但成为长期带毒者。
2 病理变化
2.1 母猪
母猪流产时，肉眼可见子宫内膜有轻微炎症，胎盘部分钙化，胎儿在子宫内死亡后被软组织吸收。组织学病变为母猪的妊娠黄体萎缩，子宫上皮组织和固有层有局灶性和弥散性单核细胞浸润。感染胎儿死后可见多种组织和器官有范围广泛的细胞坏死、炎症和核内包涵体[4]。
2.2 胎儿及仔猪
大多数死胎、死仔或弱仔可见皮下充血或水肿、出血、体腔积有淡红或淡黄色渗出液、脱水等；肝、脾、肾有时肿大、脆弱或萎缩；个别死胎、死仔皮肤出血，弱仔生后半小时先在耳尖，后在颈、胸、腹部及四肢上端内侧出现淤血、出血斑，半天内皮肤变紫而死亡。组织学检查，可见死胎或死仔大脑灰质、白质和软脑膜有以增生的外膜细胞、组织细胞和浆细胞形成的血管套为特征的脑膜脑炎变化，一般认为是猪细小病毒感染的特征性病变[5]。
3 实验室检验
根据流行病学临床症状和病理变化可做出初步诊断，确诊需进一步做实验室诊断。
3.1 细菌培养
无菌采集病死猪的淋巴结、肺、肝、脾等病料，将病料接种于麦康凯血琼脂平板、巧克力琼脂平板及肉汤培养基中，37℃恒温培养48 h，未见致病菌生长。
3.2 病原分离
取流产胎儿、死亡仔猪的脑、肺脏、肾等病料经研磨、稀释、过滤处理后接种PK-15细胞系或者ST细胞系，然后再37℃ 5% CO2条件下培养，进行病毒分离。
3.3 病原鉴定
3.3.1 PPV荧光抗体染色 通过免疫荧光技术观察胎儿组织的病毒抗原是诊断PPV的最好方法[6]。该方法可直接镜检组织冰冻切片。取疑似病猪的扁桃体或者母猪产出的死胎、木乃伊胎，然后将各种组织做冰冻切片，用荧光抗体诊断液染色待检PPV标本片，将染色标本片置湿盒中，放入37℃培养箱作用30 min。取出用PBS液（pH 7.2～7.6）冲洗和漂洗15 min（中间换液1次），再用去离子水冲洗除盐，放置标本片让其自然干燥，然后滴加磷酸甘油，盖上洁净的盖玻片，放于荧光显微镜下观察。若发现细胞内有亮绿色荧光颗粒集结，而对照无现象，则可判定有 PPV 抗原。
3.3.2 PPV酶标抗体直接染色法 在普通生物显微镜下观察染色情况，若未接种PPV的正常对照细胞片中细胞核无棕色着染现象，而接种的PPV的细胞片中细胞核着染，即可确诊。
3.2.3 普通RT-PCR方法检测 根据PPV的基因序列，设计、合成特异性引物，采用普通RT-PCR方法检测死亡胎儿、仔猪相关组织病料内的PPV，若显示阳性即说明感染该病毒。
3.3.4 血凝试验（HA） 在96微孔板中进行，自左至右每孔中预先加入50 μL生理盐水（或者PBS溶液），然后取病毒原液或者收获液（将出现病变的细胞培养物反复冻融3次，2 000 r/min离心10 min，除去细胞碎片，收获病毒液）。自左至右按1∶2、1∶4、1∶2n作倍比稀释，每孔加入50μL，最后—孔设为对照。后每孔再加入50 μL的0.5%豚鼠红细胞（或者1%鸡红细胞），在微型振荡混合器上振荡1 min混匀后，置37℃温箱中作用15～30 min，判定结果，以50%的红细胞能发生凝集判为终点，样品出现凝集终点的最高稀释度定为HA滴度。
3.4 抗体检测
3.4.1 血凝抑制试验（HI） 取发病仔猪组织浸出液制备成血凝素，并稀释成8个血凝单位。取患病初产母猪血清1 mL，注入试管中，后再向试管中加入8个凝集单位的血凝集1 mL，摇匀，然后再向试管中加入1%的鸡血细胞，置37 ℃恒温培养箱中30 min，观察试管中有无凝集现象。以100%抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的滴度，即血清效价。凡是被PPV阳性血清抑制血凝者，该病毒即为PPV[7]。
3.4.2 酶联免疫吸附试验（ELISA） 相对于HI是个更好的选择。鉴别ELISA还可以区别PPV感染的动物和接种疫苗的动物。
4 防制措施
4.1 严防引进猪带毒，发病猪场做好控制
引入猪的健康问题直接影响猪场的安全。猪场应避免从外地购进种猪、仔猪，尤其是禁止从疫区购进。规模化猪场在引进种猪、小型养殖场和家庭猪场在引进仔猪的时候，应选择规范化的、无规定疫病的猪场，引进时，必须进行检测，确认抗体为阴性后方可引入，引回的生猪须在本场的隔离圈舍隔离观察，观察期限按照当地卫生监督所规定执行，一般为15～30 d。引进公猪精液时，必须进行检查，PPV阴性者方可使用。发病猪场应特别防止小母猪在第1胎受孕时被感染，或把其配种期拖延到9月龄，因为此时母源抗体已消失[8]。
4.2 严格控制猪群，做好隔离和消毒
养殖生产过程中，一旦发现产死胎和木乃伊胎的母猪，必须做到紧急隔离饲养，母猪、仔猪等带毒猪在隔离过程中，必须配备专门的饲养员、饲养用具等，并与健康猪群所用器具严格分开，避免交叉感染。一旦发病，对猪舍彻底清洗消毒，乙醛消毒剂、高浓度的次氯酸钠（2 500 μg/L）或者7.5%过氧化钠溶液能达到理想的消毒效果。同时，做好灭蚊、灭鼠工作，避免蚊子等吸血昆虫的叮咬和疫病传播。对那些流产或产木乃伊胎同群的幸存仔猪不能留作种用，同样第1胎发病母猪的后代也不留作种用。对死亡猪、胎儿及病猪的粪便、污物、饲料等进行无害化处理，并加强消毒和定期监测[9]。
4.3 规模猪场应严格按照免疫程序做好猪细小病毒的免疫接种工作
选用通过国家GMP体系认证的厂家生产的安全、高效、优质的疫苗，根据猪场的具体情况做好免疫。推荐免疫程序为：新生仔猪PPV疫苗的免疫接种可以选择在20周龄左右进行，后备种猪要在配种前20 d以前接种，经产母猪应在产后15 d进行，每年接种2次，连续3年即可；种公猪每年春秋两季分别进行；对于曾发生过PPV病的猪，大多数猪感染后获得免疫力，体内已产生持续时间长、滴度较高的抗体，可以获得良好的保护，这些猪不需再接种[10]。
4.4 定期进行免疫抗体监测
频率一般是每半年进行1次，按饲养数量15%随机抽样猪只，采血后进行抗体检测，以达到掌握猪群免疫水平和免疫效果的目的，根据检查结果，对抗体保护率不到70%的猪只及时接种，坚决淘汰免疫耐受猪；小型猪场和家庭猪场为确保猪只健康，也必须坚持抗体检测，特别是在怀疑发病的时候。
实践证明，猪细小病毒病发病过程中往往引起其他疾病的继发感染，从而使疾病的诊断、治疗变得非常复杂，这也是目前养猪生产中猪病难以诊断和防治的根本原因所在。在养猪生产过程中，应该认真贯彻落实预防保健综合措施，从根本上减少畜禽疾病的发生，提高养殖生产的经济效益。
参考文献：
[1] 饶 霖，刘保群，诸庆衍，等. 猪细小病毒病的防治措施[J].中国畜牧兽医文摘，2013，29（1）：178.
[2] 潘丽亚. 猪细小病毒病的防治[J].中国畜牧兽医文摘，2013，29（2）：114
[3] 华玉殊，冯 艳. 猪细小病毒病的防治方法[J].中国畜禽种业，2012（12）：115.
[4] 郝铁兵. 猪细小病毒病的流行、诊断与预防[J].养殖技术顾问，2012（12）：91.
[5] 杨 莉，刘立宾. 猪细小病毒病的流行及诊治[J].养殖技术顾问，2012（10）：123.
[6] 吕惠序. 猪细小病毒病的危害及综合防制[J].养猪，2013（3）：127-128.
[7] 刘 建，汤德元，罗险峰. 猪细小病毒病诊断技术研究进展[J].猪业科学，2012（7）：89-93.
[8] 仇 铮，任晓峰，崔尚金. 自动免疫力已经产生猪细小病毒的致病机制与防控策略[J].世界华人消化杂志，2013，21（1）：66-70.
[9] 杨作丰. 猪细小病毒研究现状及综合防控[J].现代畜牧兽医，2013（3）：40-41
[10] 卫功树. 浅谈猪细小病毒与母猪繁殖失能[J].现代农业科技，2007（14）：176.
