非洲马瘟概况综述

    吴颢　赵静　肖冉　王巧娜　阮征

    摘要：介绍了非洲马瘟病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断及疫苗研究情况，分析了非洲马瘟防控现状，提出了防控非洲马瘟的目标及措施，为我国防范非洲马瘟疫情提供依据。

    关键词：马瘟;非洲马瘟病毒;防控

    中图分类号：S858.21 ? ? ? ?文献标识码：A ? ? ? ?文章编号：1007-273X（2020）08-0008-03

    非洲马瘟（African horse sickness， AHS）是由非洲马瘟病毒（African horse sickness virus， AHSV）感染马属动物引起的一种急性或亚急性非接触的虫媒介传染病[1]。普遍认为AHS原发于非洲，库蠓是其传播媒介[2]，以拟蚊库蠓（Culicoides imicola）为主。该病病程短、死亡率高，有明显的季节性和地域性，多见于温热潮湿季节，在非洲撒哈拉沙漠以南是地方性流行病。世界衛生组织（OIE）将其列为A 类动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。马属动物感染后的临床症状根据种类不同而不同，主要表现为发热、皮下水肿和病毒血症，严重时伴有组织和脏器出血。马最易感，病死率可达95%，相反斑马和驴感染后几乎不表现出临床症状。近年来周边国家频频出现AHS疫情，同时我国也存在超过300种库蠓属昆虫，为AHS在我国暴发提供了条件。如何有效预防AHS是我国面临的全新挑战。

    1 ?病原学

    AHSV是呼肠孤病毒科（Reoviri-dae）环状病毒属（Orbivirus）的成员，环状病毒属还包括蓝舌病病毒（Bluetongue virus， BTV）、流行性出血热病毒（Epizootic hemorrhagic disease virus，EHDV）以及马器质性脑病病毒（Equine encephalitis virus，EEV）。其中AHSV与EEV和BTV较为相似[1]。

    AHSV病毒颗粒直径约为75 nm，主要由衣壳（Capsid）、内膜（Inner envelop）、内核心壳（Core shell）和病毒基因组（Genome）构成[2]。32个壳粒构成衣壳双层20面立体对称结构，基因组为10个长短不等的双链RNA 片段，3个长片段L1～L3;3个中等片段M4～M6;4个短片段S7～S10。分别编码结构蛋白VP1～VP7及非结构蛋白NS1～NS3和 NS3A。蛋白VP1、VP3、VP4、VP6、VP7构成内衣壳。蛋白VP2、VP5构成外衣壳[3]。3个非结构蛋白（NS1、NS2和NS3/3A）主要存在于受感染的细胞中[4]。

    AHSV病毒有9个抗原性不同的血清型（AHSV 1～9），但在血清学试验或疫苗免疫上经常出现某些交叉反应[5]。1型至8型只存在于撒哈拉沙漠以南的部分地区，但20世纪90年代在西班牙和葡萄牙暴发的AHS是由4型引起的。9型分布最为广泛，在非洲之外也有流行。2019年，斯威士兰、乍得向OIE报告发生非洲马瘟疫情，2020年泰国向OIE报告发生非洲马瘟疫情，都疑似由9型引起的。

    AHSV病毒对酸碱度较为敏感，pH低于6.0易失活，pH 3.0迅速失活，pH 7.0～8.5则保持活性。对乙醚、氯仿等有一定的抵抗力，还能抗胰蛋白酶，但在0.1%甲醛溶液中48 h即可被灭活。不耐高温，于60 ℃ 30 min即失活。

    AHSV病毒在血液或血清中可长期存活，在4 ℃或室温条件下甚至可存活多年。即使载体腐败，病毒仍能存活。病毒经Parker培养基培养后，冻干或-70 ℃冷冻保存，复苏后保持较高活性，但在（-50）～（-20） ℃极易失活[6]。

    2 ?流行病学

    2.1 ?流行现状和地理分布

    目前，AHSV 在撒哈拉沙漠南部的非洲热带和亚热带地区呈地方性流行，范围很广，西起塞内加尔、埃塞俄比亚，东至索马里，并且向南扩展至南非北部[7，8]。后传播到北非、中东、阿拉伯半岛、西南亚和地中海区域国家。1987—1990年，传播至西班牙、葡萄牙。2020年3月泰国也暴发非洲马瘟疫情，目前它在亚洲的流行病学情况还不清楚。

    2.2 ?传染源、易感动物和传播途径

    自然条件下，斑马是AHSV的天然宿主，但其基本不表现临床症状，在病毒传播中主要作为传染源。马属动物及其杂交种都是易感动物，马尤其是幼龄马最为易感;骡较易感;驴具有耐受性。AHSV主要依靠虫媒介传播，由库蠓类昆虫叮咬在易感动物间传播，其中拟蚊库蠓是最重要的传播媒介。伊蚊、蛰蝇、按蚊等吸血昆虫也可传播。我国存在的蓝舌病也由此类虫媒传播，表明AHSV在我国传播有成熟条件。

    3 ?临床表现

    AHSV自然感染的潜伏期一般为5～7 d，根据引起临床症状的不同可分为发热型、心型、肺型和混合型[8]。

    发热型是最轻型，通常只有温和到中等程度的发热和眶上窝水肿，无死亡，病程短，很快恢复正常。多发生在低毒力株病毒感染，或是发生于具有一定抵抗力的感染动物，是斑马惟一能表现出来的症状类型[9]。

    心型呈亚急性型，以持续几周的发热为特征。病程发展很慢，有部分病例可恢复。主要的临床表现是皮下水肿，表现为头部、颈部皮下水肿，发热，上眼睑、口唇和腭等部位肿胀，并向胸、肩及腹部扩展。发生水肿的部位不会低于四肢。有时结膜充血，眼中有出血点，舌的腹侧面可能有出血斑。常伴有腹痛症状，致死率超过50%[2]。濒死期病马有呼吸频率增加、倒地横卧、肌肉震颤、出汗等表现。

    肺型呈极急性经过，发展非常快，多见于流行初期或新发病的地区。通常有明显的精神沉郁和发热（40～42 ℃），心跳加速、呼吸困难导致痉挛性咳嗽，头颈大量出汗，最终鼻孔扩张，流出大量泡沫样液体，结膜发绀。患此型疾病的马匹多数因呼吸困难而死亡，仅有少数病例恢复，预后极度不良，致死率常常超过95%[7]。

    混合型是AHS最常见的类型，呈现肺型和心型两种病型的临诊症状，多呈亚急性经过，心肺混合型。致死率约70%，通常在发热开始后的1周内因肺水肿和心脏衰竭而死亡[2]。

    4 ?病理变化

    不同类型病变各异，但主要特征为急性肺水肿和心肌损害（心肌炎和心肌的弥漫性出血），心肺有黄色胶冻样液体，肝轻度肿胀，淋巴结急性肿胀，脾多不肿大。

    肺型最显著的病变是肺小叶间水肿和胸腔积液。全肺呈粉红色或红色，整个支气管树充满白色泡沫。腹部和胸腔内充满大量黄色透明液体。胃底部充血，肠系膜、腹膜、盲肠和结肠浆膜有点状出血。

    心型最主要的损伤是皮下、筋膜下、肌内组织出现大量的黄色明胶样液体，肌肉呈茶褐色并有出血。心包内充满黄色或红褐色液体，心内外膜点状或斑状出血。肺脏在非混合型感染时有点状出血。盲肠和结肠浆膜表面有出血点。肝脏肿大呈暗褐色、脂肪变性、充血。脾脏肿大，有大量出血点。

    混合型的损伤与心型和肺型所发生的损伤一样。

    5 ?诊断

    OIE和FAO等国际组织推荐的AHSV实验室检测方法主要分为病原学和血清学检测方法。病原学方法主要是病毒分离和鉴定。血清学检测方法有补体结合试验、酶联免疫吸附试验、中和试验。

    5.1 ?病原学检测

    病料样品采集：病畜全血应于发热期采集，最好用EDTA或OPG（50%甘油水溶液+0.5%草酸钠溶液+0.5%石炭酸溶液）处理，4 ℃保存待检[8]。血清采集双份，分别在急性期和康复期或急性期和相隔21 d采集，于-20 ℃保存。取病死动物的脾、肺和淋巴结在研钵中用无菌沙研磨后，加入10%甘油制备成10%～20%的悬浮液，4 ℃保存或送检[8，10]。

    病毒分离、鉴定：2～4日龄的乳鼠脑内接种是原代分离AHSV的首选方法。取血液或肺、脾、淋巴结等病料的灭菌上清液，接种于2～4日龄乳鼠脑内，观察4～10 d;若出现神经症状则需要在乳鼠脑内继代接种。也可用感染组织处理后的上清液、红细胞裂解液接种仓鼠肾细胞、马肾细胞及鸡胚细胞进行病毒培养，观察细胞病变或进行荧光抗体染色检查。

    5.2 ?血清学检测

    5.2.1 ?补体结合（CF） ?试验因补体结合反应抗体是群特异性的，与非洲马瘟的9种补体抗原具有群特异性反应。可用灭活的马属动物血清（60 ℃ 30 min）进行补体结合试验对该病进行诊断。

    5.2.2 ?中和抗体试验（VN） ?因中和抗体是型特异性抗体，滴度上升较慢，需要5 d或更多时间才能得出结果，故诊断价值小，主要用于AHSV的血清分型。

    5.2.3 ?酶联免疫吸附试验 ?ELISA具有群特异性和高敏感性，建立的间接ELISA方法可以鉴别血清中的非洲马瘟病毒抗体，具有良好的特异性和灵敏性。目前商业化ELISA试剂盒的准确率达95%。

    5.2.4 ?RT-PCR ?敏感性和特异性高，可检测多种样品，操作简单快速，是目前用于实验室诊断的主要方法。原理是基于AHSV基因组s7的设计特异引物，然后进行荧光定量检测。经试验实时荧光定量RT-PCR快速检测方法灵敏度可达10拷贝/μL。

    5.2.5 ?环介导等温扩增原理 ?基于AHSV的VP7保守序列，设计特异性扩增引物。然后通过对反应体系中各组分浓度、反应温度及时间的优化，建立快速、灵敏的检测方法。该检测方法具有快速、特异、灵敏、操作简单、设备要求低的特点，适合用于AHSV现场快速检测。

    鉴别诊断应注意与马器质性脑病、血小板减少性紫癜和马病毒性动脉炎、马钩端螺旋体病、巴贝斯虫病等区别。尤其是易与马器质性脑病引起的临床症状和损伤相混淆[11，12]。

    6 ?疫苗

    6.1 ?弱毒疫苗

    多价弱毒疫苗能产生稳定的免疫力，但偶尔会有严重的副作用，风险较大[13，14]。

    6.2 ?灭活疫苗

    灭活疫苗的优点是不会有严重副作用。但生产成本较高，且接种程序复杂，才能达到较高水平保护性免疫力[15]。

    6.3 ?亚单位疫苗

    体外表达VP2和VP5蛋白作为疫苗的基础组分。接种该疫苗的动物能产生针对同源病毒的中和抗体，有明显保护作用。

    无疫情国家及地区均禁止使用AHS弱毒疫苗，以防控为主。

    7 ?防控目标

    基于泰国发生非洲马瘟疫情，最近疫点离我国边境直线距离不足800 km，疫情传入我国的风险较高。而我国是已获得OIE认可的非洲马瘟历史无疫国。故防控AHS的目标是采取一切措施防止AHSV传入我国。当发生可疑病例时，应及时确诊，并进行隔离;一旦确诊，立刻按照《中华人民共和国动物防疫法》的规定采取紧急、强制性的控制和扑灭措施。封锁疫区，扑杀病畜并作无害化处理，对被病畜污染的环境进行彻底消毒，喷洒杀虫剂、驱虫剂等消灭媒介昆虫。

    8 ?防控措施

    8.1 ?加强边境防控

    高度警惕境外传入风险，密切关注境外疫情动向 ，抓好疫情预警、边境地区防控、口岸检疫、野生马属动物巡查、打击走私等工作，严防非洲马瘟疫情传入。

    8.2 ?提升应急能力

    应建立完善的AHS監测体系和应急队伍，一旦发现马属动物出现AHS临床症状，或大量发病死亡等情况，能进行快速反应、及时处置，防止疫情扩散。

    8.3 ?夯实技术储备

    要深入开展非洲马瘟病毒病原学研究，加强快速诊断等技术研究储备。组织具备条件企业紧急生产、储备相应数量应急用疫苗。加强实验室检测能力，提高非洲马瘟病原学检测能力。

    8.4 ?加强宣传培训

    加大非洲马瘟防控知识宣传普及力度，提升马属动物养殖、经营等相关从业人员生物安全意识。提升畜牧兽医人员开对非洲马瘟的预警水平和早期识别、及时报告、快速处置能力。

    9 ?展望

    AHS是马类疾病中致死率最高的一种疾病，虽然地域性较强，但近年来全球一体化进程加剧，疫病流行范围急剧扩大，经由邻近国家传入我国风险与日俱增。而目前AHS疫苗发展不足以应对疾病暴发。要提高防控意识，强化防控手段，将疫病拒之于国门之外。同时加大对疫苗研究的投入。吸取国外优秀防控经验，建立快速高效的非洲马瘟检测监测方法，针对AHSV流行病学以及病原学特征加强联防联控，避免我国畜牧业遭受损失。

    参考文献：

    [1] COETZER J A W，THOMSON G R，TUSTIN R C. Infectious diseases of livestockwith special reference to southern Africa[M].New York：Oxford University Press，1994.460-475

    [2] SELLON D C，LONG MT.Equine Infectious Diseases[M].2nd edn. Philadelphia：Elsevier Health Sciences，2014.181-188.

    [3] GRIMES J，BASAK A K，ROY P，et al.The crystal structure of bluetongue virus VP7[J].Nature，1995，373：167-170.

    [4] GRUBMAN M J，LEWIS S A.Identification and characterisation of the stuctural and nonstructural proteins of African horse sickness virus and determination of the genome coding assignments[J].Virology，1992，186：444-451.

    [5] LAVIADA M D，ROY P，SANCHEZ-VIZCAINO J M，et al.The use of African horse sickness NS3 protein expressed in bacteria，as a marker to differentiate infected from vaccinated horses[J].Virus research，1995，38：205-218.

    [6] MIRCHAMSY H，HAZRATI A.A review of the aetiology and pathology of African horse sickness[J].Arch Inst Razi，1973，25：23-46.

    [7] MELLOR P S.Epizootiology and vectors of African horse sickness virus[J].Comp Immunol Microbiol Infect Dis，1994，17：287-296.

    [8] BRYANS J T，GERBER H. Equine Infectious Diseases III[M]. Paris：Elsevier Inc ，1972.

    [9] HOWELL P G. Emerging Diseases Ofanimals[M].Rome FAO Agricultural Studies，1963.71-108

    [10] HAMBLIN C，ANDERSON E C，MELLOR P S，et al.The detection of African horse sickness virus antigens and antibodies in young Equidae[J].Epidemiol Infect，1992，108：193-201.

    [11] COETZER J A W，THOMSON G R，TUSTIN R C.Infectious diseases of livestock with special reference to southern Africa[M].Cape Town：Oxford University Press，1994.476-479.

    [12] VENTER G J，GROENEWALD D，VENTER E，et al.A comparison of the vector competence of the biting midges，Culicoides （Avaritia） bolitinos and C.（A.）imicola，for the Bryanston serotype of equine encephalosis virus[J].Med Vet Entomol，2002，16：372-377.

    [13] NOBEL T A，NEUMANN F.Vaccination against African horse sickness and postvaccination reactions in Israel[J].Refu Vet，1961， 18：168-173.

    [14] PARVI K M，ANDERSON C R.Isolation of vaccine strains of African horse sickness virus from brains of two horses given polyvalent vaccine[J].Indian J Vet Sci Anim Husb，1963，33：215-219.

    [15] STUDDERT M J.Virus infections of vertebrates[M].Elsevier Press：Amsterdam，1996：101-123.

    收稿日期：2020-06-10

    作者簡介：吴 ?颢（1987-），男，湖北武汉人，助理兽医师，硕士，主要从事重大动物疫病防控工作，（电子信箱）150303893@qq.com;通信作者，

    阮 ?征（1966-），男，正高级畜牧师，主要从事重大动物疫病防控工作，（电子信箱）972147621@qq.com。