QuECHERS-高效液相色谱法测定西红柿、苹果、茶叶中的吡虫啉

    邱慧珍

    摘 要：本研究的目的是建立测定西红柿、苹果、茶叶中吡虫啉残留量的QuECHERS-高效液相色谱法（HPLC），通过加标测定出其回收率、精密度、检出限均在理想范围之内。具体测定方法为，样品经1%醋酸乙腈20mL、硫酸镁6g、醋酸钠1.5g，涡旋提取，离心，提取液经400mg PSA、400mg C18、1200mg MgSO4净化，吸取上清液上机测定。结果显示，吡虫啉在0.2～5.0mg/L范围内线性关系良好，R=0.9999，西红柿、苹果、茶叶基质回收率均在93%～100%范围内，西红柿、苹果检出限0.02mg/kg、定量限0.1mg/kg；茶叶检出限0.05mg/kg，定量限0.2mg/kg。

    关键词：吡虫啉 西红柿 苹果 茶叶 高效液相色谱法 QuECHERS

    1 引言

    吡虫啉属于烟碱类超高效杀虫剂，不仅有广谱、高效、低毒、低残留，害虫不易产生抗性等优点，还具有触杀、胃毒和内吸等多重作用。害虫接触药剂后，会因中枢神经正常传导受阻而麻痹死亡。目前，吡虫啉的检测方法主要有毛细管电泳[1]、荧光光谱[2]、胶体金免疫层析[3]、液相色谱、液质联用等。GB/T 23379-2009《水果、蔬菜及茶叶中吡虫啉残留的测定 高效液相色谱法》中，吡虫啉的测定主要通过乙腈提取、盐析、浓缩液经固相萃取净化、乙腈洗脱、高效液相色谱等程序进行检测，但该标准方法回收率低、耗时长，不适用于大批量农残检测。本文通过QuECHERS方法选取3个代表性样品（西红柿、苹果、茶叶）测定吡虫啉残留量，希望建立一种简单、快捷、灵敏、价廉的液相色谱法。

    2 材料与方法

    2.1 试剂与仪器

    吡虫啉标准品（Dr.Ehrenstorfer GmbH，批号：G149997 CAS：138261-41-3）；乙腈（德国默克，批号：JB079830）；QuECHERS提取包（岛津，货号5010-050020）；QuECHERS净化包（岛津，货号5010-015033）；液相色谱仪-二极管阵列检测器（Waters，E2695/2998）；电子天平（奥豪斯仪器，AR2140）；离心机（湖南湘仪有限公司，H1850）；医用超纯水机（杭州万洁水处理设备有限公司，WJ-RO-70）。

    2.2 方法

    2.2.1 色谱条件

    色谱柱C18（ACE 250×4.6mm，5μm）；进样量：10μL；流速：1.0mL/min；检测波长：270nm；流动相A：0.1%磷酸水，流动相B：乙腈；梯度：0～5min、85%A～80%A，5～15min、80%A～75%A，15～22min、75%A～0%A，22～28min、0%A～85%A。

    2.2.2 标准贮备液

    准确称取10mg吡虫啉标准品置于10mL容量瓶中，加入乙腈超声溶解，定容，得到1000μg/mL的标准贮备液，于-18℃的冰箱保存。

    2.2.3 样品处理

    水果、蔬菜类样品各称取10g，茶叶类样品称取2g，分别置于50mL离心管中；准确加入1%醋酸乙腈20mL，剧烈震荡1min；将离心管置于冰水浴中，加入提取试剂包（6g硫酸镁、1.5g醋酸钠），剧烈震荡1min，离心；准确移取5mL上清液到净化管中，剧烈震荡30s，离心，取上清液，待上机测定。

    3 结果

    3.1 色谱条件选择

    在200～400nm波长范围内对吡虫啉标准品进行扫描，发现在269.8nm处有最大吸收，故选择270nm为检测波长。对GB/T 23379-2009中流动相梯度进行优化，于15min时提高有机相比例。该色谱条件下，吡虫啉于13min出现峰值，24～28min处有背景杂峰，因此洗脱时间由46min缩短至30min，以节约分析时间。

    3.2 标准曲线和精密度

    标准贮备液“2.2.2”分别逐级稀释成浓度为0.2、0.5、1.0、2.0、5.0μg/mL的系列浓度标准溶液，按照“2.2.1”色谱条件上机测定，以吡虫啉标准溶液浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），得线性方程Y=9.4×104X；R=0.9999。在0.2～5.0mg/L范围内，吡虫啉的进样质量浓度与其对应的峰面积线性关系良好。2μg/mL浓度标液连续进样6针，RSD为0.4%，精密度良好。

    3.3 样品测定和加标回收

    在空白的苹果样本中添加不同浓度的吡虫啉标准溶液，添加浓度分别为0.4、1.0、2.0mg/kg，每个浓度做6个平行样品。结果显示，回收率分别为95%～100%、 94%～96%、93%～95%，相对应的RSD分别为2.7%、1.2%、0.9%。

    在空白的西红柿样本中添加不同浓度的吡虫啉标准溶液，添加浓度分别为0.4、1.0、2.0mg/kg，每个浓度做6个平行样品。结果显示，回收率分别为95%～100%、94%～96%、94%～96%，相对应的RSD分别为2.7%、0.9%、0.8%。

    在空白的茶叶样本中添加不同浓度的吡虫啉标准溶液，添加浓度分别为2.0、5.0、10mg/kg，每个浓度做6个平行样品。结果显示，回收率分别为100%、96%～98%、93%～96%，相对应的RSD分别为0%、1.1%、1.3%。

    3.4定量限和检出限

    空白苹果基质加标，当加标水平为0.1mg/kg时，信噪比S/N值大于10，定量限为0.1mg/kg；当加标水平为0.02mg/kg时，信噪比S/N值大于3，检出限为0.02mg/kg。空白茶叶基质加标，当加标水平为0.2mg/kg时，信噪比S/N值大于10，定量限为0.2mg/kg；当加标水平为0.05mg/kg时，信噪比S/N值大为3，检出限为0.05mg/kg。

    4 结论

    本研究选取蔬菜、水果、茶叶为典型样本，按照QuECHERS前处理方法，结合高效液相色谱法测定吡虫啉的含量。结果表明，上述实验方法的检出限、加标回收率、精密度和重复性均符合要求，且基质效应不明显。另外，QuECHERS还具有简便、快捷、节省溶剂，以及对实验室前处理设备条件要求低等优点，因此更适合大多数实验室进行批量检测筛查。

    参考文献：

    [1] 孙娟，陈冠华，王坤，等.毛细管电泳在线电推扫测定蔬菜中3中氯化烟碱類农药残留[J].分析化学，2020，38（8）：1151-1155.

    [2]季仁东，赵志敏，张琳，等.苹果汁中吡虫啉农药残留荧光检测研究[J].光谱学与光谱分析，2013，33（3）：668-671.

    [3]楼小华，高川川，朱文静，等.胶体金免疫层析法快速检测烟草中吡虫啉残留[J].食品安全质量检测学报，2017，8（5）：1739-1744.