试管倒插法诊断家畜血吸虫病效果观察

    汪承相+张建华+李勇+柯栋栋+张琼+费世清+程刚+汪少华

    摘要:2006-2008年采用斑点金标免疫渗滤法(DIGFA)血检诊断阳新县牛(羊)血吸虫病,血检结果为阳性病牛(羊)再采用试管倒插法(顶管法)进行粪便孵化而确诊。结果表明,实行以上两种方法进行诊断,准确率极高。是控制血吸虫病流行、保护人民身体健康的最佳办法。

    关键词:血吸虫病;诊断;试管倒插法;阳新县

    中图分类号:S855.9+9 文献标识码:B 文章编号:1007-273X(2016)05-0005-02

    血吸虫病是我国南方地区流行最为严重的人畜共患寄生虫病。建国后,开始实施以控制传染源为主的综合防治方针。实行围垦灭螺,查治人畜疾病,研究多种传染源的诊断方法。传统的血吸虫病检查方法主要为粪检,其粪便样量是每头牛50~100 g,山羊10~15 g。实行一粪一检,工作量大且效果不佳。笔者从2006年开始在阳新县采用斑点金标免疫渗滤法(DIGFA)诊断牛(羊)血吸虫病,先用血检筛选出结果为阳性病牛(羊),再用粪便孵化(顶管法)进一步确诊。几年来,通过采取一系列综合防治措施,使阳新县家畜血吸虫病感染率逐年下降。耕牛感染率由2006年的6.58%下降到2008年的1.66%,下降4.92个百分点。山羊感染率由6.67%下降到2008年的0.67%,下降了6.0个百分点。从而使牛(羊)血吸虫病的感染强度逐年减弱(水牛更为明显)。实践证明,每年实行春查、春治、秋查、秋治。一粪三检,采用上述两种检查方法,可收到较好的效果。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    (1)粪缸(试管盖),试管,20~40目粪筛,橡皮筋,记号笔,竹筷,剪刀,医用纱布,脱脂棉,直径50 cm筛箕(过滤井水、河水),30%氯漂白粉50 g,水温计2支,10 cm×20 cm涂有墨汁的黑色纸板5块,塑料缸2口,食盐1 000 g。

    (2)待检牛(羊)粪样,牛200~300 g,山羊45~80 g。家畜血吸虫病粪样送检登记卡。

    1.2 方法

    (1)洗粪水。洗粪水在孵化前1 d准备充足,河水、井水先用备好的两层纱布中间夹一层脱脂棉,放在筛萁上将水过滤于塑料缸中,并在水中加入30%氯漂白粉,比例按每50 kg加0.39 g;如用自来水,应将水存放于容器中20 h,使氯元素逸出后备用。

    (2)编号。粪缸用记号笔编号。被检牛(羊)粪样依次放在预先排列好的粪缸旁,一粪三检,做好登记。粪筛、筷子放入粪缸中,加入洗粪水约650 mL。

    (3)洗粪。三人一组,检查人员将粪样按量挑入粪筛中搅动淘洗(注:牛粪>80 g,羊粪>15 g),淘洗到可以看到粪样中的粗纤维为止。

    (4)沉淀换水。第一次为30 min;第二次为20 min,第三次10 min。从第一次起,每次待粪渣下沉后,倒出上层粪汁1/3;第二次为上层粪水一半。

    (5)孵化。第二次换水后加入孵化水。孵化水用家庭饮用纯净水。将纯净水加满粪缸后沉淀10 min,盖上盖。盖上前每支试管在离试管口4~6 cm处套上橡皮筋以作固定。防止因粪缸盖中央圆孔与试管不合而滑落粪缸中。将纯净水加入试管中,用右手食指和中指夹住试管,大拇指堵住试管口,成为密封状态,使试管为倒立状态,将带有试管盖的试管放入粪缸中,并轻轻移开大拇指,使粪缸中粪水顶托住试管中的纯净孵化水。这样试管虽然是倒立于粪缸中,但试管水仍是清亮的。然后将已合好盖子的粪缸移到平面台子上(如木桌子、铺板、乒乓球台)进行孵化观察。

    (6)观察毛蚴。粪缸已沉淀虫卵孵化1~3 h后,在孵化水温适宜时,毛蚴开始从卵中逸出。毛蚴有较强的向光性,均向试管清水中集中做左右上下直线运动。观察时需将涂有墨汁的黑色纸板置于试管前方,成为黑色背景有助于观察。毛蚴呈梭形,灰白色,即便是一个毛蚴在试管中运动也易于发现。

    2 注意事项

    (1)用粪量要足。用一粪三检,每个粪样牛不得少于300 g,羊不得少于45 g。应收集新鲜粪便。

    (2)洗粪尽量将虫卵洗入粪缸中,羊粪洗粪时用镊子夹碎,倒水应轻倒上部粪汁,以免将虫卵倒掉,且只能倒掉1/3粪水。

    (3)做到一粪缸一粪筛-双筷子,切不可交叉使用。

    (4)孵化诊断结束后粪缸、粪筛、筷子应消毒清洗后再用。

    (5)观察毛蚴时应分组按洗粪换水先后顺序观察。观察时间为加盖后1、2、3 h,每一试管观察时间不少于2 min。且眼睛不要移动。

    (6)孵化台应设在光线充足的地方。

    (7)夏季水温高于15 ℃时,为延缓毛蚴过早逸出,孵化水应加入1.0%~1.2%盐水。

    (8)个别兽医由于责任心不强,将一牛粪便分成多样送检,采血时,将一牛血液分成多份血样送检或采集陈旧粪样,直接影响诊断结果。应加以重视。

    3 结果与分析

    由表1、表2可见,2006-2008年共血检耕牛 28 151头,山羊8 686只。粪检耕牛7 744头、山羊 2 038只,耕牛感染率下降了4.92个百分点,山羊感染率下降了6.0个百分点。

    4 讨论

    诊断家畜血吸虫病的方法很多,实践中大范围内普查诊断可采用斑点金标免疫渗滤法(DIGFA),该方法省时、省工、易操作,可作为血检的首选。但血检也有其不足之处。一是评判失误(误判),出现假阳性。二是因疫区家畜接触疫水而重复感染,重复治疗。牛(羊)体内已没有成虫(但体内有抗体),血检时仍呈阳性反应,因而粪检是最准确的诊断手段。经多次血检呈阳性反应而粪检为阴性的家畜,笔者没有统计。病畜体内产生了抗体,粪检为阴性的家畜,在后续不感染的情况下,其体内抗体衰减规律有待研究。阳新县血吸虫病经过多年的查治,其感染强度逐年减弱。检查过程中要注意,粪便孵化中,粪样量应相对增加。每头牛粪样量应采集200~300 g,山羊45~80 g,一粪三检,一年两次(春、秋),可提高检出率。此外,由于粪样虫卵少,孵化后试管中毛蚴只有1~3只,因此化验人员要有过硬的技术和高度的责任心,仔细观察。血吸虫病防治是以政府主导、多部门协作,多手段并用的一项系统工程,按照我国血吸虫病控制和阻断标准,只有人畜同步防治,认真落实国务院各项防治措施,保证各项防治经费落实到位,才能最终消灭血吸虫病。