猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断措施

    郁星星　邢涛　李小华

    摘要：介绍了猪繁殖与呼吸综合征的病毒生物学特性、流行病学、症状与病理变化，并对其诊断方法进行了总结。

    关键词：猪繁殖与呼吸综合征；临床症状；病理变化；诊断

    中图分类号：S858.28文献标识码：B文章编号：1007-273X（2014）03-0028-02

    猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的猪的繁殖障碍和呼吸系统的传染病。该病可以感染任何年龄的猪，以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状为特征，造成怀孕母猪流产、产死胎和仔猪高死亡率。猪繁殖与呼吸综合征已成为全球性猪病，给世界养猪业造成了巨大的经济损失，它也成为世界兽医学界异常关注的疾病之一。

    1生物学特性

    猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）属动脉炎病毒科，动脉炎病毒属，有囊膜的单股RNA病毒，具有高度的变异性，根据其差异可将PRRSV分为两种基因型：即欧洲型（代表株Lelystadvirus）和美洲型（代表株VR 2332）[1]。PRRSV对有机溶剂敏感，对pH要求高，在pH6.5～7.5间相对稳定，pH高于7.5或低于5时，感染力很快消失，这显示了很强的pH依赖性。从自然发病猪中分离到的PRRSV不具有血凝活性，不能凝集鸡、鹅、豚鼠、牛、马、猪、绵羊和人的红细胞。

    2流行病学

    20世纪80年代末，美国暴发了一种从未见过的毁灭性疾病，随后欧洲和亚洲于90年代初也相继暴发。1991年，欧洲研究人员指出导致这种疾病暴发的病原是一种从未见过的动脉炎病毒，并采用猪繁殖与呼吸综合征的名称命名该病[2]。

    我国于1996年首次报道该病并分离到PRRSV[3]，随后该病在我国呈蔓延趋势。目前PRRS已遍及全球主要养猪国家和地区，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。

    3症状与病理变化

    3.1经典的PRRSV感染

    PRRS的临床症状表现多样，并受很多因素影响。PRRSV主要引起妊娠母猪的流产和仔猪的呼吸道症状，临床上伴有高热、部分猪耳部及四肢末端发绀等症状，剖检病变主要为间质性肺炎，多数仔猪肺尖叶、心叶呈暗红色或黄、红病灶相间，全身淋巴结有不同程度的淤血、出血、肿胀。但是仅凭临床症状很难做出准确诊断，为此荷兰制定的临床诊断标准为死产率达到20%，母猪流产率达到8%，断奶仔猪死亡率达到26%。

    3.2高致病性PRRSV感染

    与经典猪蓝耳病相比，高致病性猪蓝耳病的主要特征是发病猪出现41 ℃以上持续高热、发病猪不分年龄段均出现急性死亡、仔猪出现高发病率和高死亡率，发病率可达100%，死亡可达50%，母猪流产率可达30%。临床主要表现为发热、厌食或不食；耳部、口鼻部、后躯及股内侧皮肤发红、淤血、出血斑、丘疹；眼结膜炎；咳嗽、哮喘等呼吸道症状；后躯无力、不能站立或摇摆、转圈运动、抽搐等神经症状；部分发病猪呈顽固性腹泻。

    剖检变化为肺出血、淤血以及以心叶、尖叶为主的灶性暗红色实变；扁桃体出血、化脓；脑出血、淤血、软化灶及胶冻样物质渗出；心衰、心肌出血、坏死；脾、淋巴结新鲜或陈旧性出血、梗死；肾表面和切面部分可见出血点、出血斑等；部分猪肝可见黄白色坏死灶或出血灶；肾表面凹凸不平；肠出血等[4]。

    4诊断

    4.1病毒的分离

    病毒分离被认为是最为确切的方法，但费时费力。需采用病毒适应性好的细胞，主要有猪肺巨噬细胞（PAMs）、MA104细胞系的克隆株Marc 145及HS2H细胞、CL2621细胞等。MA104细胞系的克隆株Marc 145及HS2H细胞、CL2621细胞等是传代细胞系，培养和传代过程相对简单。以Marc 145为例，在接毒后72 h，细胞折光性增强，少数细胞集聚成丛，细胞先膨胀后圆缩，集聚增多，最后崩解脱落。传代细胞的病变相对明显，但敏感性上不如猪肺泡巨噬细胞（PAMs），但因其操作和制备简单、经济而被广泛应用[5]。

    4.2免疫学方法

    PRRSV特异性抗体的诊断方法主要有间接免疫荧光（IFA）、免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）、血清中和试验（SN）和酶联免疫吸附试验（ELISA）。其中IFA、SN和ELISA在美洲诊断实验室应用较多，而欧洲主要用IPMA检测PRRSV抗体。血清学试验的结果受到检测用分离病毒与感染猪病毒相关性的影响。

    4.2.1间接免疫荧光抗体技术（IFA） IFA是由美国农业部国家兽医实验室研究建立的一种检测PRRSV抗体的方法，感染后8 d就能检测出抗体，目前广泛应用于北美。但是本法需做细胞培养和荧光显微镜观察，因此对仪器设备要求比较高，并且主观性较强，所以在一些实验室应用受到一定的局限。

    4.2.2免疫过氧化物酶单层细胞实验（IMPA） 这是荷兰中央兽医研究院最早建立的一种检测PRRSV抗体的方法，目前仍然广泛应用于欧洲。但是此种方法需要特殊的实验条件，在操作和判断过程中存在较多的人为因素干扰，需要较强的实践经验，容易出现假阳性等现象，因此我国尚未广泛采用此方法。

    4.2.3血清中和实验（SN） 该方法主要用于检测PRRSV抗体。使用Marc 145细胞，在96孔微量板上进行传统的SN试验不能检测急性感染期的抗体，需用双份血清。Jusa和akikawa等在血清和病毒混合液中加补体，提高了反应的敏感性，可在PRRSV感染早期作出诊断。这种改良的方法最早在接种后8 d即能检出PRRSV抗体。该方法在微量细胞培养上存在较大困难，并且技术性较强，不适宜大规模推广应用。

    4.2.4酶联免疫吸附实验（ELISA） 该方法主要用于检测PRRSV抗体。ELISA具有很好的特异性和敏感性，对于早期抗体的检测比用IPMA更为敏感。ELISA检测方法有多种：间接ELISA、捕捉ELISA、阻断ELISA、夹心ELISA等。美国某公司的商品化ELISA试剂盒检测的特异性能达到98%～99%，现在又推出检测性能更好的第2代产品。商品化的试剂盒具有高度的一致性，自动化程度高等特点，现已成为国际上血清学检测的主要标准，许多新建血清学检测方法都以此为标准检测符合率。有的可以同时检测出美洲型和欧洲型，而且快速简便。

    4.3分子生物学方法

    4.3.1反转录 聚合酶链式反应（RT PCR） 该方法特异性强，能够鉴别诊断其他易混淆的病毒性传染病，如细小病毒病、伪狂犬病、猪瘟、传染性胃肠炎和猪流感等。该方法的敏感性和特异性远远超过IFA，是目前普遍使用的实验室检测方法。

    目前应用RT PCR技术诊断PRRSV已取得了很大进展，国内娄高明等[5]根据PRRSV的ORF7序列，设计一套引物并建立了RT PCR方法，试验结果证明其效果较好，且可从基因水平上区分PRRSV美洲型和欧洲型，而且对国内疑似为PRRS送检样进行检测，确定其毒株为美洲型。总之，RT PCR方法是一种快速、准确、灵敏的诊断方法。

    4.3.2基因探针 国外学者用地高辛标记的核酸探针检测细胞培养和福尔马林固定组织中的PRRSV获得成功。该探针174bp，主要针对PRRSV的核衣壳蛋白基因，能特异地检测组织或细胞中PRRSV的RNA。但由于标记探针的价格高、技术操作复杂等问题，普遍使用尚存在一定困难。

    5结论

    综上所述，PRRS给当前养猪业造成了严重的危害，通过不同检测技术对PRRS进行确诊及监测是防控该病的重要环节。在临床应用过程中，有必要充分考虑每种诊断方法的优点及局限性，根据实际生产需要以及试验条件等综合情况来选择确定检测方法，这样才能更好地发挥各种诊断技术自身的特点，准确地诊断疾病并制定出合理的预防控制措施。

    参考文献：

    [1]刘书亮，王红宁.PRRS的病原学和免疫学研究进展[J].四川畜牧兽医，2000，27（7）：79 83.

    [2] 郭传凤.PRRS的病毒简介[J].猪与禽，2012（6）：9.

    [3]郭宝清，陈章水，刘文兴.从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J].中国畜禽传染病，1996，2（2）：l 4.

    [4]刘光清，蔡雪晖，仇华吉，等.猪繁殖与呼吸综合征的研究进展[J].中国预防兽医学报，2001，23（1）：72 76.

    [5]娄高明，杜伟贤，谢明权，等.猪繁殖与呼吸综合征病毒RT PCR诊断方法的建立[J].中国兽医学报，2000，20（2）：141 144.