布鲁氏菌病实验室诊断技术

    王勤

    摘要：对实验室常用的几种布鲁氏菌病检测方法进行了分析，为实验室检测不同动物群体选择相应的诊断方法提供参考。

    关键词：实验室；布鲁氏菌病；检测方法

    中图分类号：S858 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2018）04-0025-01

    布鲁氏菌病（简称布病）是一种危害性极大的传染性人兽共患病，在世界范围内广泛流行。其主要临床症状为雌性动物流产、生育力下降，雄性动物睾丸炎，甚至不育，给畜牧业造成严重的损失。

    1 病原学方法

    从疑似感染布病的个体中提取血液或其他样本，对样本处理后在选择培养基上培养，如有菌落生长则通过细菌染色、生化试验等方法鉴别是否为布鲁氏菌，该方法准确性高，但危险性高、操作难度大、分离时间长，对试验环境要求严格，需在特定试验条件下进行。

    2 PCR技术

    随着分子生物学技术的发展和普及，可通过 PCR、荧光定量PCR以及环介导等温扩增（LAMP）等技术对布病进行诊断。其中PCR技术具有特异性高、灵敏度好、操作较简单等优点，可用于鉴别不同种属的布鲁氏菌。荧光定量PCR 技术相较于传统 PCR 技术具有灵敏度高、高通量和方便快捷等优势，但由于其引物和探针设计较为困难，且限制较多，对专业技术有较高要求。LAMP可用于对奶、组织等样本的检测，具有操作方便、可视性强、特异性高和试验条件要求低等优点，其灵敏性可达10 pg/反应，且可以在普通水浴下完成反应，适于基层检测使用。但是LAMP存在多重扩增较为困难，样本污染等问题，且对引物设计要求很高限制了该技术的进一步使用。

    3 血清学检测方法

    3.1 虎红平板凝集试验（RBPT）

    BRPT是在平板上将30 μL抗原与30 μL血清样品混合，4 min内观察是否出现凝集来判定阴阳性，该法使用方便、结果判定简单、价格低廉，适用于各种家畜布病的田间筛选，在国际上广泛应用，但是特异性较差，易出现假阳性。

    3.2 试管凝集试验（SAT）

    SAT定量是所有试验中最准确的，所以一直作为确诊试验使用，曾经在国际上得到了广泛应用。近年，由于快速凝集试验和ELISA等检测技术的发展，对比研究发现SAT的敏感性和特异性比其他常用方法低。在发达国家，布病的血清学检测方法基本已淘汰了SAT，在国际贸易中也未将布病SAT列入。

    3.3 补体结合试验（CFT）

    CFT是公认的特异性和敏感性较高的血清学检测方法，适用于各种家畜布病的检测，至今在国际贸易中仍是重要的诊断方法。CFT在试验过程中需要对溶血素、补体、抗原等多个组分进行标定，操作十分繁琐，需经验丰富的人员进行组分准确滴定、试剂保存和结果判断等，因此该法在实际检测过程中难以得到推广，仅在相关科研机构和稀有动物检疫确诊中使用。

    3.4 酶联免疫吸附试验（ELISA）

    ELISA 技术具有成熟稳定、方便快捷、特异性敏感性高、高通量等优点且其对相关试验人员要求较低，适合临床样本的快速检测。目前有iELISA 与cELISA两种方法用于布病诊断，其中iELISA具有高度敏感性，但不能用于检测自然病原株诱导产生的布病抗体，因此仅用作对免疫接种过的牛进行筛选，并非确认；cELISA 具有比iELISA更高的特異性，可用于排除牛布鲁氏菌接种产生的抗体反应。

    3.5 荧光偏振试验（FPA）

    FPA是一种定量免疫分析技术，已经用于北美和欧洲的布病根除计划，是OIE 规定的国际贸易指定方法，其原理和ELISA相似，但操作简便，用时更短。大量的研究结果表明，在布病的抗体检测方法中，荧光偏振的特异性和敏感性比较高。但是，该方法试剂盒昂贵，且需要在专门仪器内使用，限制了该方法的推广。

    3.6 胶体金试验

    国内学者初步建立了检测布病抗体的胶体金方法，其敏感性和特异性均达到了90%以上。胶体金试验具有方便快捷、敏感性高、结果易判定等优势，适合临床快速诊断的需要。但是，现有商品化胶体金试纸条标准参差不齐，符合率和敏感性较差，仍需要进一步发展。

    4 细胞免疫学检测方法

    目前细胞免疫学检测布病的方法较少报道，原因大致如下：一是细胞免疫状态受多种因素影响，难以找到合适的特异性指标进行衡量；二是易感动物个体差异较大，容易引起误差；三是细胞免疫检测方法成本更高，操作更复杂；四是相关研究仍不成熟，且难度较大。

    5 小结

    布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的具有传染性的人畜共患病，OIE将其列为B类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。诊断布病的方法有多种，但并非每种方法都适用于所有流行病学情况，因此，需根据诊断方法的适应性及其优缺点，针对不同的动物群体选择相应的诊断方法进行检测。