HPLC法同时测定小儿柴桂退热颗粒中6个成分的含量

    温晓露 王群明

    

    摘 要：测定小儿柴桂退热颗粒中6个成分含量的方法，结果表明该方法操作简便，结果准确，重复性好，可作为小儿柴桂退热颗粒中含量测定的检测方法。

    关键词：HPLC;小二柴桂颗粒;成分

    DOI：10.12249/j.issn.1005-4669.2020.25.316

    小儿柴桂退热口服液是由柴胡、桂枝、葛根、浮萍、黄芩、白芍和蝉蜕7味药材制备而成的中药复方制剂，具有发汗解表、清里退热之功效，临床用于小儿外感发热等症。现行标准2015年版《中华人民共和国药典》一部含量测定项下仅以葛根中葛根素含量作为该制剂质量控制指标，未对方中君、臣药材的柴胡、桂枝的活性成分含量进行质量控制。目前，对小儿柴桂退热口服液的研究多是针对其与其他药物在临床上的联合应用，但尚未有多种活性成分含量同时测定的研究报道。中药复方制剂成分复杂，临床疗效的发挥是多种成分协同作用，多成分含量同时测定可以弥补单一成分对制剂质量控制的不足。为提高该制剂的质量控制水平，本研究建立了HPLC法同时测定小儿柴桂退热颗粒中6个有效成分的含量测定方法，为提高小儿柴桂退热颗粒的质量提供参考。

    1 仪器与试药

    Agilent 1200型高效液相色谱仪，包括在线脱气装置、自动进样器、柱温箱、DAD检测器（用于各检测成份波长的选择）;Shimadzu 高效液相色谱仪，包括Shimadzu LC-20ATVP泵，Shimadzu SPD-20AVP 紫外检测器，CTO-20A 柱温箱，SIL-20A自动进样器（用于方法学考察和含量测定）。Mettler AE 240天平，宁波科生仪器厂KS-300E超声波清洗器。

    葛根素对照品（批号110752-200912）、大豆苷对照品（批号111738-200501）、黄芩苷对照品（批号110715-201016，95.2%）、大豆苷元对照品（批号111502-200101）、桂皮醛对照品（批号111595-200604）和黄芩素对照品（批号111595-200604）均购自中国食品药品检定研究院。A、B厂家共12批样品均为自购。甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，磷酸为分析纯。

    2 方法与结果

    1）溶液制备。（1）对照品储备液及混合对照品溶液精密称。取各对照品适量，制成0.6200mg·mL-1葛根素对照品储备液，0.2104mg·mL-1大豆苷对照品储备液，0.5503mg·mL-1黄芩苷对照品储备液，0.2076mg·mL-1大豆苷元对照品储备液，0.01139mg·mL-1桂皮醛对照品储备液，0.1996mg·mL-1黄芩素对照品储备液。精密量取各对照品储备液适量，制成含葛根素0.1240mg·mL-1、大豆苷0.04208mg·mL-1、黄芩苷0.05503mg·mL-1、大豆苷元0.02076mg·mL-1、桂皮醛0.004556mg·mL-1、黄芩素0.007984mg·mL-1的混合对照品溶液。（2）黄芩素对照品溶液精密量取黄芩素对照品。储备液2mL，置50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制得含黄芩素0.007984mg·mL-1的溶液，即得。（3）供试品溶液取小儿柴桂退热颗粒2袋，研细、混匀，精密称取约1g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声（300W，40kHz）提取30min，放冷，再称定，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液即得。（4）阴性对照溶液按处方中药味的比例制成。缺葛根、黄芩、桂枝的阴性对照样品100g，按“2.1.3”项下方法制成阴性对照溶液。

    2）色谱条件。色谱柱：AgilentZORBAXSB-C18（250mm×4.6mm，5μm）;流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），线性梯度洗脱（0～5min，93%B;5～20min，93%B→89%B;20～23min，89%B→85%B;23～30min，85%B→83%B;30～35min，83%B→77%B;35～50min，77%B→52%B;50～53min，52%B→15%B;53～55min，15%B），流速1.0mL·min-1，检测波长250nm（0～35min，测定葛根素和大豆苷）、270nm（35～48min，测定黄芩苷和大豆苷元）、290nm（48～50.5min，测定桂皮醛）、278nm（50.5～55min，测定黄芩素），流速1.0mLmin-1，柱温40℃;供试品溶液、阴性對照溶液进样量3μL，对照品溶液进样量5μL。在上述色谱条件下，小儿柴桂退热颗粒中葛根素、大豆苷、黄芩苷、大豆苷元、桂皮醛、黄芩素6个成分分离良好，理论塔板数大于4000，分离度大于1.5，见图1。

    3）精密度考察。分别精密西区混合对照品溶液5μL，连续进样5词，考查方法的精密度。结果葛根素、大豆苷，黄芩苷、大豆苷元、桂皮醛和黄芩素峰面积的RSD分别0.58%、0.22%、0.71%、0.72%和0.60%，表明仪器精密度良好。

    4）重复性考察

    测定6个成分的峰面积，计算含量。结果样品中葛根素、大豆苷、黄芩苷、大豆苷元、桂皮醛和黄芩素平均含量分别为3.456、0.4862、0.8949、0.1860、0.2588、0.004950mg·g-1，RSD分别为0.99%，1.2%，0.72%，1.4%，1.7%和1.0%，表明方法的重复性好。

    3 讨论

    1）指标成分的选择。柴胡作为方中君药，具有疏散退热、疏肝解郁、升举阳气之功效，皂苷类物质在柴胡属植物中含量最高，活性最强。桂枝中含有的主要活性成分为挥发油类，其中桂皮醛70%～80%，这类物质具有发汗解肌、温通经脉等功效，临床常用于风寒感冒、脘腹冷痛等症。处方药材中所含的黄芩苷具有抗菌、抗病毒的作用，黄芩作为中医临床和中成药中最为常用的中药之一，研究显示，黄芩苷等黄酮类化合物为黄芩的主要有效成分，具有解热抗炎、抗肿瘤、解毒、保肝及调节免疫等药理作用。白芍属于补虚药，具有养血调经、敛阴止汗、柔肝止痛的功效，现代药理研究发现，芍药苷为其主要活性成分，而酚酸类物质没食子酸具有抗氧化、抗炎、抗自由基等功能。为了更好地保证小儿柴桂退热口服液的安全性和有效性，本文以葛根素、大豆苷、黄芩苷、大豆苷元、桂皮醛、黄芩素为指标评价该制剂的质量，更全面合理。

    2）流动相的选择。在流动相的选择上，以乙腈和水为流动相，用相同的梯度洗脱方法进行实验，结果发现有些峰拖尾较为严重;以乙腈和0.1%甲酸溶液、乙腈和0.1%乙酸溶液为流动相，结果发现基线漂移较为严重，可能是因为甲酸和乙酸在250～290nm处有吸收。所以最终确定乙腈和0.1%磷酸溶液为流动相，结果测定的图谱基线平稳，大多数色谱峰峰形较好。采用文献报道的实验条件，未达到理想的分离效果，采用本文的实验方法各个成分能够实现较好分离。最终确定本文所采用的实验方法，分离效果较好，能达到基线分离，且基线平稳。

    3）厂家的样品含量比较及工艺改进建议。从2个厂家的样品含量比较分析来看，B厂样品葛根指标性成分含量略高，而A厂样品黄芩和桂枝类的指标性成分含量较高。其中桂皮醛的含量差异最大。由于桂皮醛具有很强的挥发性，不同厂家制剂工艺不同，导致其含量差异较大，而桂皮醛具有多种药理活性，建议厂家对桂枝的提取工艺进行改进，可以将桂枝先提取挥发油，然后再将挥发油喷到成品的颗粒上。柴胡按性状不同分为“南柴胡”和“北柴胡”，而药材产地、采收季节、炮制、储存、生产工艺等因素可能会使含量差异较大。因此，在中药制剂生产过程中应对其原料来源、药材质量及制备工艺等进行严格控制，以确保产品质量稳定。

    参考文献

    [1]中华人民共和国药典2015年版.2015：546ChP 2015.Vol I[S].2015：546

    [2]崔宇.小儿柴桂退热颗粒联合小儿肺热咳喘口服液治疗儿童感冒咳嗽临床疗效探讨[J].临床医药文献电子杂志，2017，4（20）：3896.